O meio SIM é um ágar semissólido e diferencial, especialmente desenvolvido para auxiliar na identificação de algumas bactérias, principalmente da família Enterobacteriaceae. É composto de tripteína, peptona, sulfato de ferro, sulfato de amônio, tiossulfato de sódio e ágar..
Este meio permite a execução de três testes importantes: a produção de sulfeto de hidrogênio (HdoisS), formação e motilidade indol, daí vem a sigla SIM. Por sua grande utilidade, não pode faltar em um laboratório de bacteriologia..
Ao contrário de outros meios, deve ser semissólido para que a capacidade de movimento de algumas bactérias seja detectável. Nesse sentido, este teste funciona muito bem para Enterobacteriaceae, mas não em bastonetes Gram negativos não fermentadores, onde é preferível utilizar outros métodos, como a gota suspensa..
O meio SIM permite distinguir certas propriedades específicas que caracterizam algumas bactérias em relação a outras. Por exemplo Escherichia coli se distingue por ser HdoisS (-), Indol (+) e motilidade (+), enquanto Proteus mirabilis é HdoisS (+), indol (-), motilidade (+).
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É um meio de cultura considerado diferencial, pois seu uso distingue os microrganismos capazes de produzir sulfeto de hidrogênio daqueles que não o fazem; Também destaca aqueles que formam o indol a partir do triptofano daqueles que não o formam e, por fim, diferencia as bactérias móveis das imóveis..
Como qualquer meio de cultura, possui elementos que fornecem os nutrientes necessários para o desenvolvimento de microrganismos não exigentes. Esses elementos são representados por peptonas e tripteína.
O desenvolvimento do microrganismo no meio é essencial para podermos observar a presença ou ausência das características que este meio avalia..
A letra S da sigla SIM refere-se à produção de sulfeto de hidrogênio (HdoisS). Bactérias capazes de formar sulfeto de hidrogênio absorvem o enxofre do tiossulfato de sódio.
Uma vez que o HdoisS -gás incolor-, reage com o sal de ferro presente no meio, formando sulfeto ferroso, bem visível (precipitado preto). Bactérias que não formam HdoisSim, deixe o meio da cor original (bege).
A presença do precipitado preto pode dificultar a interpretação da motilidade. No entanto, sabe-se que a maioria das Enterobacteriaceae produtoras de HdoisS são motilidade positiva, como Salmonella, Proteus e Citrobacter. Além disso, o precipitado preto que cobre quase todo o meio, sugere motilidade positiva.
A segunda letra da sigla SIM é "I", que representa a formação do indol.
Nesse sentido, a tripteína, além de fonte de nutriente, cumpre outra função fundamental. Esta peptona é rica em um aminoácido chamado triptofano, portanto, pode mostrar a bactéria que produz a triptofanase.
Essa enzima é responsável pela clivagem do aminoácido triptofano, com a conseqüente formação de indol (substância incolor), ácido pirúvico e amônio..
Por isso, para demonstrar essa reação, é necessário adicionar uma substância reveladora (reagente de Ehrlich ou reagente de Kovac). Ambos reagem com o indol, formando uma substância em forma de anel vermelho-fúcsia na superfície do ágar. Se o anel fúcsia aparecer, o teste de indol é interpretado como positivo.
As bactérias que não possuem esta enzima não formarão o anel e isso é interpretado como um teste de indol negativo.
É importante ressaltar que o teste do indol deve ser o último a ser interpretado, pois, uma vez adicionado o reagente, o meio fica turvo, dificultando a visualização da motilidade..
Finalmente, a letra "M" da palavra SIM significa mobilidade. Para poder avaliar a motilidade, este meio é estrategicamente semissólido, uma vez que esta característica é essencial para podermos observar se há movimento bacteriano ou não. As bactérias que apresentam flagelos são aquelas que apresentam este teste positivo.
Um teste positivo ficará evidente quando for observada turvação, tanto no inóculo inicial quanto ao seu redor. Considerando que, bactérias não móveis apenas se desenvolvem no caminho do inóculo inicial.
Pesar 30 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. A mistura é deixada em repouso por 5 minutos e então aquecida à ebulição, mexendo freqüentemente até a completa dissolução..
Distribuir a mistura em tubos de ensaio com tampas de algodão e autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Remova o suporte de tubos da autoclave e deixe solidificar na posição vertical, de modo que o meio tenha a forma de um bloco.
Para sua conservação é mantido na geladeira até o seu uso. O meio preparado deve ter um pH final de 7,3 ± 0,2.
No momento da inoculação do meio, ele deve estar em temperatura ambiente. A cor do meio é bege.
Meça 150 ml de álcool amílico ou isoamílico ou butílico. (Use um dos três mencionados).
Dissolva 10 g de p-dimetilaminobenzaldeído. Em seguida, adicione lentamente 50 ml de ácido clorídrico concentrado.
O reagente pronto para uso é incolor ou amarelo claro. Deve ser mantido em uma garrafa âmbar e armazenado no refrigerador. Não use se assumir uma cor marrom escura; isso indica que ele está danificado. Este reagente é preferido quando se trata de Enterobacteriaceae.
Pesar 2 g de p-dimetilaminobenzaldeído e dissolver em 190 ml de álcool etílico absoluto e misturar lentamente com 40 ml de ácido clorídrico concentrado. Mantenha o reagente de Kovac da mesma forma. O reagente de Ehrlich é mais usado para bactérias não fermentadoras e anaeróbias.
O meio SIM é muito utilizado em laboratórios de bacteriologia. Tem a vantagem de três características essenciais na identificação de Enterobacteriaceae poderem ser observadas no mesmo tubo..
A forma correta de semear este meio é utilizando a agulha, com a qual uma porção da colônia pura a ser estudada é retirada e inserida verticalmente no centro do meio. Uma única estocada deve ser realizada. A punção não deve atingir o fundo do tubo, o correto é cobrir apenas dois terços da profundidade.
Não é recomendado repetir o inóculo, pois isso pode levar a falsas interpretações de motilidade positiva. O meio inoculado é incubado aerobicamente a 37 ° C durante 24 horas..
Após o tempo, observa-se se houve ou não produção de HdoisS e motilidade é lida. Finalmente, o indol é revelado, adicionando 3 a 4 gotas do reagente de Ehrlich ou Kovac, misturar suavemente e interpretar.
Como controle de esterilidade, um ou dois tubos são incubados sem inoculação em estufa a 37 ° C por 24 horas. Espera-se que após este período não haja crescimento ou mudança de cor.
Como controle de qualidade, podem ser utilizadas cepas conhecidas certificadas, tais como: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella Sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.
Os resultados esperados são: Escherichia coli HdoisS negativo, indol e motilidade positiva, Enterobacter aerogenes apenas motilidade positiva, Salmonella typhimurium HdoisS e motilidade positiva, com indol negativo. Proteus vulgaris tudo positivo, enquanto Klebsiella pneumoniae Y Shigella Sonnei tudo negativo.
-Algumas cepas de Morganella morganii, Entre outras cepas, podem produzir um pigmento acastanhado neste meio devido à produção de melanina, não se confundindo com o precipitado de sulfeto ferroso. Em profissionais inexperientes, essa situação pode gerar falsos positivos na interpretação do teste H.doisS.
-Bactérias aeróbias estritas só irão crescer na superfície do tubo, tornando difícil interpretar a motilidade.
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