O Ágar Vogel-Johnson é um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial, especialmente formulado para o isolamento de Staphylococcus aureus. Este meio foi criado por Vogel e Johnson em 1960 a partir da modificação do ágar telurito glicina formulado em 1955 por Zebovitz, Evans e Niven..
A modificação consistiu no aumento da concentração de manitol presente no meio e na incorporação de um indicador de pH. A fórmula atual é composta por tripteína, extrato de levedura, manitol, fosfato dipotássico, cloreto de lítio, glicina, vermelho de fenol, ágar, solução de telurito de potássio 1% e água..
Deve-se notar que existem outros meios que, como o ágar Vogel-Johnson, são seletivos para o isolamento de S. aureus, tais como ágar manitol salgado e ágar Baird Parker. Nesse sentido, pode-se dizer que a base do ágar Vogel-Johnson é uma mistura entre o ágar manitol salgado e o ágar Baird Parker..
No primeiro, as colônias de S. aureus Eles se distinguem por fermentar o manitol e tornar o indicador de pH amarelo. Por outro lado, no segundo, o S. aureus é caracterizada por reduzir telurito a telúrio e formar colônias cinza a pretas. Ambas as propriedades são observadas no ágar Vogel-Johnson..
Este meio, como suas contrapartes, é útil para a detecção de Staphylococcus aureus em amostras de alimentos, controles sanitários de produtos industriais e em amostras clínicas.
Índice do artigo
O meio Vogel-Johnson contém tripteína e extrato de levedura; Ambas as substâncias fornecem aminoácidos de cadeia longa que servem como fontes de carbono e nitrogênio necessários para o crescimento bacteriano. As bactérias capazes de crescer neste meio absorvem os nutrientes dessas substâncias..
O ágar Vogel-Johnson é capaz de inibir o crescimento de bactérias Gram negativas e até mesmo de algumas bactérias Gram positivas, favorecendo o desenvolvimento de estafilococos coagulase positivos. As substâncias inibidoras são telurito de potássio, cloreto de lítio e glicina..
As substâncias que compõem esse meio diferencial são o manitol e o telurito de potássio. O manitol é um carboidrato e, quando fermentado, são produzidos ácidos que fazem com que o meio passe de vermelho a amarelo, o que acontece graças à presença do indicador de pH fenol vermelho..
Já o telurito incolor, quando reduzido a telúrio metálico livre, assume uma coloração cinza escuro a preta..
O Staphylococcus aureus fermenta o manitol e reduz o telurito a telúrio. É por isso que as colônias típicas de S. aureus neste meio eles são cinzas ou pretos rodeados por um meio amarelo.
As bactérias que crescem neste meio e não reduzem o telurito nem fermentam o manitol, formarão colônias transparentes circundadas por um meio de cor vermelha, ainda mais intensas que a cor original, devido à alcalinização do meio pelo uso de peptonas.
Por outro lado, as bactérias que reduzem a telurita, mas não fermentam o manitol, crescerão como colônias cinza ou pretas rodeadas por um meio vermelho escuro..
Se o meio foi preparado sem a adição de telurito de potássio, colônias de S. aureus se desenvolveria como colônias amarelas, rodeadas por um meio amarelo, como no ágar manitol salgado.
O fosfato dipotássico mantém o equilíbrio osmótico do meio e ajusta o pH à neutralidade 7,2. Enquanto o ágar dá consistência sólida ao meio de cultura.
Esta solução não é incluída no meio desidratado, pois não pode ser esterilizada em autoclave. Por isso, é preparado separadamente e adicionado ao meio já esterilizado..
Algumas casas comerciais vendem a solução de telurito de potássio a 1% pronta para uso. Se você deseja se preparar em laboratório, proceda da seguinte forma:
Pesar 1,0 g de telurito de potássio e medir 100 ml de água destilada. Dissolva o telurito de potássio em uma parte da água e complete a quantidade de água até atingir 100 ml. Esterilize a solução pelo método de filtração.
Pesar 60 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. A mistura é aquecida até à ebulição para ajudar na dissolução completa. Durante o processo de dissolução, o meio é agitado frequentemente.
Esterilize em autoclave a 15 libras de pressão e 121 ° C por 15 minutos. Retire da autoclave e deixe descansar até que o meio atinja uma temperatura de aproximadamente 45 a 50 ° C. Adicione 20 ml da solução de telurito de potássio a 1% previamente preparada.
Misture e despeje em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar e peça invertido nos suportes de pratos para depois armazenar na geladeira até o uso.
O pH final do meio preparado deve ser 7,2 ± 0,2.
Antes de semear uma amostra, espere que a placa atinja a temperatura ambiente..
A cor do meio preparado é vermelho.
Embora possa ser usado para o isolamento de S. aureus em qualquer tipo de amostra, é utilizado principalmente para análises microbiológicas de produtos farmacêuticos, cosméticos e alimentos.
Recomenda-se que o inóculo seja denso. A semeadura pode ser feita por estriação com cabo de platina ou por superfície com espátula Drigalski.
As placas são incubadas a 35-37 ° C por 24 a 48 horas em aerobiose.
As seguintes cepas de controle podem ser usadas para realizar o controle de qualidade no meio Vogel-Johnson:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ou Proteus mirabilis ATCC 43071.
O resultado esperado é o seguinte: para cepas de S. aureus Crescimento satisfatório com colônias pretas rodeadas por meio amarelo. A fim de S. epidermidis crescimento regular com colônias translúcidas ou pretas rodeadas por meio vermelho.
Da mesma forma, para E. coli a inibição total é esperada, e para Proteus mirabilis inibição parcial ou total; se crescer, o fará com moderação e as colônias serão pretas cercadas pela metade vermelha.
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