O água peptonada É um meio de enriquecimento líquido não seletivo, usado principalmente como diluente para amostras de alimentos ou outros materiais. Este meio do ponto de vista químico é muito simples, contém peptona de carne, cloreto de sódio e água..
Possui um certo valor nutricional, permitindo que a amostra seja enriquecida. Se houver abuso de bactérias, este meio tem o poder de reparar a viabilidade. É especialmente útil na recuperação de bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae..
No caso da recuperação de Salmonelas, recomenda-se o uso da variante de água peptonada tamponada; Este serve como meio de pré-enriquecimento para a amostra, neste caso contém outros elementos como fosfato dissódico e fosfato dipotássico..
Normalmente, água peptonada é preparada em pH neutro, no entanto, existem outras variantes onde é necessário que o pH seja 8,5 ± 0,2 (alcalino), porque a bactéria a ser isolada é alcalina, como Vibrio cholerae.
Além disso, este meio pode ser usado como meio de base para testes de fermentação de carboidratos..
Índice do artigo
Peptonas fornecem os nutrientes necessários para o crescimento bacteriano, especialmente nitrogênio e aminoácidos de cadeia curta, enquanto o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico..
Além disso, o meio permite dispersar, homogeneizar e reparar células bacterianas danificadas por processos industriais..
Como diluente é ideal, substituindo efetivamente a solução fisiológica (SSF) ou solução tampão de fosfato (PBS).
O crescimento bacteriano é evidente pela observação de sua turvação..
Pesar 1 g de peptona e 8,5 g de cloreto de sódio, dissolver em 1 litro de água destilada. O pH deve ser ajustado para 7,0. Para isso, pode ser usado cloreto de sódio 1 N..
Pesar 15 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Homogeneizar a mistura. Se necessário, a mistura é fervida por 1 minuto para auxiliar na dissolução total. Sirva em frascos de 100 ml ou tubos de 10 ml, conforme necessário. Autoclave a 121 ° C por 15 minutos.
Resfrie e use ou guarde na geladeira. O pH final do meio é 7,2 ± 0,2.
A cor do meio desidratado é bege claro e o meio preparado é âmbar claro.
Ao preparo anterior - antes da esterilização - deve-se adicionar o carboidrato até a concentração final de 1%, mais o indicador Andrade (fucsina ácida) ou vermelho de fenol (0,018 g / L). Os tubos devem ser equipados com um sino Durham para observar a formação de gás.
Contém hidrolisado enzimático de caseína, cloreto de sódio, fosfato di-hidrogenopotássico e hidrogenofosfato de sódio dodeca-hidratado. O pH final é 7,0 ± 0,2.
Para a sua preparação pesar 20 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. Deixe descansar por aproximadamente 5 minutos. Aquecer por 1 minuto até dissolver completamente.
Despeje em potes adequados, conforme necessário. Esterilize usando a autoclave a 121 ° C por 15 minutos.
Pesar 25 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água. Proceda conforme descrito acima. O pH varia de 8,3 a 8,7.
O inóculo é feito colocando a amostra diretamente.
É usado para diluir amostras, especialmente quando há suspeita de que possam haver bactérias danificadas. Normalmente, as diluições são 1:10 e 1: 100.
Incubar por 24 horas em aerobiose a 35-37 ° C.
Para amostras de fezes em busca de Salmonella, o uso de água tamponada ou tamponada é recomendado como meio de pré-enriquecimento..
Para fazer isso, proceda da seguinte forma:
Se houver formação de fezes, colher 1 g de amostra. Se forem líquidos, pegue 1 ml de fezes e suspenda em um tubo com 10 ml de água peptonada triturada. Para esfregaços retais, descarregue o material do esfregaço no tubo com água peptonada tamponada.
Em todos os casos, misture e homogeneize muito bem a amostra..
Incubar a 37 ° C por 18 a 24 horas. Subseqüentemente, subcultura em um caldo de enriquecimento, como caldo de cistina selenita ou caldo de tetrationato a 37 ° C por mais 18-24 horas. Por fim, cultivar em meios seletivos para Salmonella, como ágar SS, ágar XLD, ágar Hektoen, entre outros..
Água peptonada é usada como meio de enriquecimento ou como diluente simples, mas se forem procuradas espécies de Salmonella, ela é usada como meio de pré-enriquecimento, conforme já descrito..
Na alimentação, proceda da seguinte forma:
Para alimentos sólidos pesar 25 g da amostra e para alimentos líquidos medir 25 ml. Coloque a referida porção em frascos contendo 225 ml de água peptonada. Misture e homogeneize a amostra.
Se houver suspeita de carga microbiana elevada, podem ser feitas diluições em série ou decimais para facilitar a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC)..
O número de diluições dependerá do tipo de amostra e da experiência do analista..
Se, pelo contrário, houver suspeita de que a carga microbiana é muito baixa, não é necessário efetuar diluições. Posteriormente, a subcultura em meios seletivos.
No caso dos alimentos do mar, como mariscos, peixes, entre outros, em busca de Vibrio cholerae ou outras espécies de Vibrio, água peptonada ajustada para pH 8,5 (água peptonada alcalina) deve ser usada.
De cada lote preparado, um a dois tubos devem ser incubados sem inoculação por 24 horas em aerobiose a 37 ° C. No final do tempo, nenhuma turbidez ou mudança de cor deve ser observada.
As cepas de controle conhecidas também podem ser usadas para avaliar sua eficácia:
As seguintes cepas bacterianas podem ser usadas para isso: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.
Em todos os casos, espera-se um desenvolvimento microbiano satisfatório, observado pela turbidez do meio..
-O meio desidratado é muito higroscópico, por isso deve ser mantido longe da umidade.
-O meio não deve ser usado se qualquer tipo de deterioração for observada.
-O meio de cultura desidratado deve ser armazenado entre 10 - 35 ° C
-O meio preparado deve ser mantido refrigerado (2-8 ° C).
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