O ágar sal e manitol ou salgado manitol é um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial. Foi criado por Chapman para o isolamento de cocos Gram-positivos patogênicos, especialmente Staphylococcus aureus.
No entanto, também é útil para isolar Staphylococus epidermidis, que às vezes pode estar presente como um patógeno oportunista, e Staphylococcus saprophyticus, patógeno urinário reconhecido, entre outras espécies.
Alguns Enterococcus são capazes de crescer neste meio, assim como certos bastonetes formadores de esporos Gram positivos..
Este meio é muito útil na análise de amostras clínicas, mas também é utilizado no estudo microbiológico de alimentos e no controle de qualidade de produtos industriais, como cosméticos, medicamentos, entre outros..
O Ágar Manitol Salgado é composto por extratos e peptonas de carne bovina, tripteína, manitol, cloreto de sódio, vermelho de fenol e ágar.
Índice do artigo
O ágar manitol é seletivo graças à sua alta concentração de sal. A salinidade atua como uma substância inibidora e previne o crescimento de bactérias Gram negativas.
Também é diferencial pela presença do carboidrato manitol e do indicador de pH vermelho de fenol. A partir disso, as bactérias capazes de fermentar o manitol produzem ácidos, acidificando o meio, tornando as colônias e o meio amarelados..
Por outro lado, colônias que não fermentam o manitol crescem no meio levando os nutrientes fornecidos pelos extratos da carne e peptonas e tripteína. A partir daí, as bactérias extraem o carbono, o nitrogênio, as vitaminas e os minerais necessários para seu crescimento..
As colônias, neste caso, podem ser rosa forte ou fraco, e o meio permanece da mesma cor ou muda para fúcsia.
O ágar é a substância que dá consistência ao meio.
Para preparar um litro de ágar manitol salgado, 111 g do meio desidratado da companhia comercial preferida são pesados e dissolvidos em 1000 ml de água destilada, usando um frasco..
O calor é aplicado com agitação frequente do meio para melhorar o processo de dissolução. Ferva por um minuto.
Coloque o frasco na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.
Ao final do tempo, retire o frasco da autoclave, deixe descansar e sirva entre 15 a 20 ml em placas de Petri estéreis quando a temperatura estiver em torno de 50 a 55 ° C..
É permitido solidificar, encomendando de forma invertida em plaqueros e mantendo na geladeira até o uso. Antes de semear uma amostra, espere a placa atingir a temperatura ambiente.
As placas são semeadas por listras ou por semeadura superficial com uma espátula drigalski. O pH final do meio preparado deve ser 7,4 ± 0,2
A cor do meio desidratado é bege claro e a cor do meio preparado é vermelho alaranjado.
Devido à sua alta seletividade, este meio é ideal para semear amostras com flora mista em que se deseja procurar a presença de Staphylococus aureus, como o principal patógeno deste gênero.
Nesse sentido, um de seus usos mais frequentes é na análise microbiológica de exsudatos faríngeos e amostras de secreção nasal, especialmente para detectar portadores assintomáticos de. S. aureus.
Alguns países implementaram esta análise como um requisito obrigatório para pessoas que desejam trabalhar como vendedores de alimentos..
Esse controle evita a contratação de transportadoras de S. aureus, evitando assim uma intoxicação alimentar massiva, devido ao consumo de alimentos contaminados com enterotoxina estafilocócica.
Também pode ser incluído na semeadura de infecções de feridas, hemoculturas, LCR, lavado broncoalveolar, entre outros.
O ágar manitol salgado é útil para isolar novamente colônias de culturas de urina de ágar CLED ou ágar sangue cujo Gram revelou cocos Gram positivos em grupos..
É válido também na análise microbiológica de alimentos, água potável, solos, entre outras aplicações..
Uma vez preparado um lote de placas com ágar manitol salgado, é aconselhável realizar um controle de qualidade. As cepas de controle são semeadas para mostrar se há ou não crescimento da mesma.
Como controle positivo, cepas conhecidas de Staphylococcus aureus. Deve crescer satisfatoriamente desenvolvendo colônias amarelas, e o meio também fica da mesma cor.
Da mesma forma, é conveniente incluir uma cepa conhecida de Staphylococcus epidermidis. Deve crescer satisfatoriamente desenvolvendo colônias rosa, e o meio permanece da mesma cor ou escurece para um rosa mais forte.
Como controle negativo, são utilizadas cepas que não devem crescer neste meio. Por exemplo, uma cepa conhecida de Escherichia coli ou Klebsiella pneumoniae. O resultado esperado é a inibição completa, ou seja, nenhum crescimento..
Além disso, uma placa não inoculada deve ser incubada. Nele não deve haver crescimento ou mudança de cor.
É importante que a placa não seja utilizada se houver sinais de deterioração, como contaminação, desidratação, descoloração, entre outros.
Ao usar meio de ágar manitol salgado, existem alguns aspectos importantes a serem considerados:
-A obtenção de um crescimento de colônias amarelas não indica que seja Staphylococcus aureus. Deve ser lembrado que algumas cepas de Enterococcus são capazes de crescer neste meio e fermentar o manitol, assim como certos bastonetes formadores de esporos Gram positivos..
Portanto, é importante realizar um Gram na colônia e um teste de catalase..
-Por outro lado, deve-se considerar que outras espécies de Staphylococcus que não aureus eles também são capazes de fermentar o manitol. Portanto, é importante fazer uma subcultura da colônia em um caldo nutritivo para retirar daí e realizar o teste de coagulase..
Entre as espécies de Staphylococcus de importância clínica para o homem que fermentam o manitol estão: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, entre outros.
Outros podem dar uma reação variável, ou seja, às vezes positiva e às vezes negativa. Alguns são S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, entre outras.
-Não é recomendado retirar colônias diretamente do ágar manitol para realizar o teste de coagulase, pois a alta concentração de sal do meio pode interferir no resultado..
-Por fim, recomenda-se incubar as placas semeadas com manitol salgado por até 48 horas, pois algumas cepas de S. aureus pode fermentar lentamente o manitol, embora isso seja raro.
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