O Ágar BIGGY É um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial. Foi projetado para isolar e auxiliar na identificação das principais espécies de Candida. Seu nome BIGGY vem da sigla em inglês Bismuth Glucose Glycine Yeast.
A fórmula original foi criada por Nickerson, por isso esse meio também é conhecido como ágar Nickerson. Atualmente é composto por extrato de levedura, glicina, dextrose, citrato de amônio, citrato de bismuto, sulfito de sódio e ágar..
O ágar BIGGY é formulado para a diferenciação de espécies complexas C. albicans, C. tropicalis, C. krusei e C. kefyr, mas outras espécies também crescem como Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum e Saccharomyces cerevisiae.
Apresenta boa sensibilidade e especificidade, porém, quando comparado a outros meios com função semelhante, está em segundo lugar, sendo superado pelo CHROMagar. Por isso, muitos laboratórios preferem o último, embora seja muito mais caro..
Deve ficar claro que o uso do BIGGY Agar, assim como de outros meios semelhantes, auxilia na rápida identificação presuntiva, mas nunca confirmatória. Portanto, métodos de identificação adicionais devem estar disponíveis; por exemplo, sistemas de identificação Vitek 32 e API 20.
Índice do artigo
O ágar BiGGY é considerado um meio parcialmente seletivo para o isolamento de leveduras, principalmente do gênero Candida, embora outros gêneros possam crescer..
É também um meio diferencial, pois dependendo das espécies envolvidas, diferentes características serão observadas em termos de aparência, cor, forma e tamanho. É considerado um meio cromogênico, devido ao desenvolvimento de diversas cores nas colônias..
A cor das colônias de leveduras se deve à presença de sulfito de bismuto no ágar. Nickerson percebeu que leveduras do gênero Candida realizam uma redução extracelular do sulfito de bismuto, transformando-o em sulfeto de bismuto (uma substância negra insolúvel). Isso resulta em colônias de marrom claro a preto..
Este ágar contém extrato de levedura e dextrose, que fornece a fonte de nutrientes básicos e energia para o desenvolvimento da levedura. A glicina é um estimulante do crescimento de leveduras, ao mesmo tempo que inibe o crescimento de certas bactérias.
Nesse mesmo sentido, o citrato de amônio e bismuto, assim como o sulfito de sódio, atuam como inibidores do crescimento bacteriano. Agar é o agente que dá ao meio consistência sólida.
Pesar 45 g do meio de cultura desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Agite e aqueça a mistura, fervendo por 1 minuto até dissolver completamente. Este meio de cultura não é autoclavável.
Ao resfriar a aproximadamente 45 ° C em banho-maria, despeje 20 ml em placas de Petri estéreis..
A cor do meio desidratado é cinza amarelado e preparado é um gel branco amarelado, no qual pode ser observado um ligeiro precipitado floculante..
O pH deve ser 6,8 ± 0,2.
O meio preparado deve ser conservado no frigorífico (4 ° C) e protegido da luz. Por se tratar de um meio que não pode ser autoclavado, deve ser utilizado o mais rápido possível. Seu uso é recomendado dentro de 3 dias de sua preparação.
As placas são incubadas à temperatura ambiente (25 ° C) por 24, 48 e 72 horas, podendo o tempo de incubação ser estendido até 5 dias..
Cada espécie de Candida desenvolve certas características que as distinguem umas das outras. Os fabricantes do meio descrevem as seguintes características para cada espécie:
-Complexo de Candida albicans: se desenvolve neste ágar como colônias lisas, redondas, marrons ou pretas, com uma leve borda micelial. Com a exceção de que a cor escura não se difunde para o meio.
-Candida tropicalis: as colônias são brilhantes, pequenas, marrom-escuras, com um centro preto e uma leve borda micelial. A coloração escura difunde-se para o meio, característica típica desta espécie, após incubação por 72 horas..
-Candida Krusei desenvolve colônias grandes, planas e de aparência áspera com uma borda marrom a preta.
-Candida parakrusei: colônias de tamanho médio, na maioria das vezes rugosas, planas. A cor pode variar de marrom avermelhado escuro brilhante a marrom avermelhado claro. A borda das colônias tem micélio extenso e amarelado.
-Candida stellatoidea: Desenvolve colônias médias, planas, marrom-escuras, quase pretas. O desenvolvimento micelial é muito escasso.
Um estudo realizado por Yücesoy e Marol em 2003, mostrou que o meio CHROMagar tem melhor sensibilidade e especificidade para a diferenciação e identificação de diferentes espécies de Candida do que o ágar BIGGY..
Para o controle da esterilidade, as placas não inoculadas são incubadas a 25 ° C, no escuro por 24 a 48 horas, espera-se que não haja nenhum tipo de crescimento ou alteração de cor..
As cepas ATCC recomendadas para controle de qualidade do meio são:
Complexo de Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida Krusei ATCC 34135. Em todos eles, o crescimento é esperado conforme descrito acima..
As seguintes cepas também podem ser usadas:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Nos dois primeiros, a inibição total é esperada, mas no caso de colônias parcialmente em crescimento serão de cor creme.
Em caso de S. aureus espera-se que seja totalmente inibido, mas se crescerem parcialmente suas colônias são brancas.
Algumas bactérias são capazes de se desenvolver neste meio e podem até ficar escuras, simulando uma colônia de Candida, mas ao fazer um esfregaço da colônia e observá-la ao microscópio, ela é facilmente descartada..
Tabela: Características das colônias de algumas leveduras em ágar BIGGY de acordo com o trabalho de Yücesoy M e Marol S.
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