O cromatograma é um registro gráfico bidimensional obtido em meio absorvente, mostrando a separação das substâncias por cromatografia. Um padrão visível, picos ou pontos, se forma no cromatograma, refletindo a separação física dos componentes de uma mistura.
A figura inferior é um cromatograma com três picos, A, B e C, de três componentes da amostra separados por cromatografia. Observa-se que cada um dos três picos tem uma altura e localização diferente no eixo do tempo do cromatograma..
A ordenada ou eixo Y registra informações sobre a intensidade do sinal (em milivolts mV neste caso). Representa o registro, dependendo do detector, de alguma propriedade física da substância ou componente separado da mistura.
A altura do pico é proporcional à concentração do componente separado da amostra em um sistema ideal. Assim, por exemplo, é fácil visualizar que o componente B é encontrado em uma proporção maior do que A e C.
Na abcissa ou eixo X, é representado o tempo de retenção dos componentes da amostra ou mistura. É o tempo que decorre desde a injeção da amostra até sua parada, sendo diferente para cada substância pura..
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É o registro final de todo o processo de cromatografia. Os parâmetros de interesse analítico são obtidos a partir dele. Isso pode ser obtido como um arquivo eletrônico, um histograma impresso ou no meio do processo; no papel, por exemplo.
O eixo Y é gerado por detectores de resposta de sinal ou intensidade, como espectrofotômetros. Uma análise ótima do tempo, das características dos picos ou manchas obtidos é essencial; o tamanho, localização, cor, entre outros aspectos.
As análises do cromatograma geralmente requerem o uso de controles ou padrões, substâncias de identidade e concentração conhecidas. A análise desses controles permite estabelecer por comparação com as amostras características dos componentes da amostra investigada..
No cromatograma pode ser realizada a observação e análise de como foi realizada a separação dos componentes de uma mistura. Seu estudo ideal permite identificar uma substância, demonstrar sua pureza, quantificar a quantidade de substâncias presentes em uma mistura, entre outros aspectos.
As informações extraídas podem ser qualitativas; por exemplo, quando as substâncias são identificadas e sua pureza determinada. As informações quantitativas referem-se à determinação do número de componentes na mistura e à concentração do analito separado..
Ao analisar os resultados do cromatograma, várias substâncias podem ser identificadas, comparando os tempos de retenção com os de substâncias conhecidas. Pode-se observar se as substâncias em estudo percorrem a mesma distância se tiverem o mesmo tempo que as substâncias conhecidas.
Por exemplo, o cromatograma pode detectar e identificar metabólitos de drogas como estimulantes e esteróides na urina de atletas. É um importante suporte no estudo e pesquisa de alguns metabólitos produzidos por doenças genéticas no recém-nascido..
O cromatograma facilita a detecção de hidrocarbonetos halogenados presentes na água potável, entre outras substâncias. É imprescindível nas análises laboratoriais de controle de qualidade, pois permite detectar e identificar os contaminantes presentes nos diversos produtos.
Em um cromatograma, você pode distinguir entre substâncias puras e impuras. Uma substância pura produziria um único pico no cromatograma; enquanto uma substância impura produziria dois ou mais picos.
Ajustando adequadamente as condições em que a cromatografia é realizada, duas substâncias podem ser impedidas de formar um único pico..
Ao analisar a área do pico do cromatograma, a concentração dos componentes da amostra pode ser calculada.
Portanto, a área do pico é proporcional à quantidade da substância presente na amostra. Esses dados quantitativos são obtidos em sistemas altamente sensíveis, como os gerados por cromatografia gasosa ou líquida, por exemplo.
Uma das classificações dos cromatogramas está intimamente relacionada aos diferentes tipos de cromatografia, que geram o cromatograma correspondente.
Dependendo das condições de funcionamento, dos detectores, entre outros aspectos, o cromatograma irá variar em seu conteúdo e qualidade..
O cromatograma pode ser gerado diretamente em papel ou em camada fina, mostrando diretamente a distribuição ou distribuição dos componentes da amostra.
É muito útil para a separação e estudo de substâncias coloridas que possuem pigmentos naturais, como a clorofila. Pode ser submetido a processos de desenvolvimento caso as substâncias não tenham cor natural, e é útil para estudos qualitativos..
O cromatograma também pode ser obtido usando um detector que registra a resposta, a saída ou o sinal final da cromatografia. Como mencionado anteriormente, este detector costuma ser um espectrofotômetro, um espectrômetro de massas, sequenciadores automáticos, eletroquímicos, entre outros..
Cromatogramas gerados em colunas, sejam de gases ou líquidos, bem como os de alta resolução em camadas delgadas, utilizam detectores.
Dependendo do tipo de detector, o cromatograma pode ser classificado em diferencial ou integral, dependendo da forma de resposta do detector..
Um detector diferencial mede continuamente o sinal de resposta do cromatograma, enquanto detectores integrais medem cumulativamente o sinal correspondente.
Um cromatograma diferencial é um cromatograma obtido por um detector diferencial. Esses detectores incluem, por exemplo, espectrofotômetros e detectores de mudanças na condutividade elétrica..
Este tipo de cromatograma mostrou o resultado da separação dos ânions de uma amostra, detectada por fotometria indireta. Os mesmos resultados também foram obtidos para o estudo de íons, por exemplo, com detecção final por condutimetria..
O gráfico superior mostra o exemplo de um cromatograma diferencial, obtido por sequenciadores automáticos de DNA (ácido desoxirribonucléico). O gráfico mostra claramente picos de quatro cores, uma cor para cada uma das bases nitrogenadas do DNA..
Com o apoio de um programa informatizado, é facilitada a interpretação da seqüência das bases do DNA analisado, bem como para analitos mais complexos..
O cromatograma integral corresponde ao obtido por um detector integral. Este cromatograma mostra a saída de um único componente em estudo. Múltiplos picos não são obtidos como no diferencial.
No cromatograma integral, um registro é obtido com uma forma descrita como uma etapa. Esta forma é a parte do cromatograma que corresponde à quantidade de uma única substância que sai da coluna..
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