O ágar sulfito de bismuto é um meio de cultura sólido, seletivo e diferencial, especialmente formulado para o isolamento de Salmonella enterica subgrupo enterica sorotipo Typhi, entre outras espécies de Salmonella. O meio é conhecido como ágar BSA por sua sigla em Inglês Bismuth Sulfite Agar..
A fórmula original do ágar bismuto sulfito foi criada em 1927 por Wilson e Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); Este continha sulfito de sódio, glicose, solução de bismuto, citrato de amônio, sulfato ferroso e ágar-ágar..
Hoje existe uma modificação do meio original, composto por extrato de carne, peptonas de carne e caseína, indicador de sulfito de bismuto, glicose, fosfato dissódico, sulfato ferroso, verde brilhante e ágar-ágar..
Existem muitos meios para o isolamento de espécies de Salmonella, mas quando se trata de recuperar o sorotipo Typhi, o ágar sulfito de bismuto tem uma vantagem notável sobre eles, uma vez que na maioria há pouca ou nenhuma recuperação desse microrganismo..
No entanto, é necessário usar mais de um tipo de meio para tentar isolar enteropatógenos, porque o ágar sulfito de bismuto é menos eficaz para outras espécies de Salmonella e para o gênero Shigella, que são inibidas ou se desenvolvem muito mal..
Deve-se observar que, de todas as espécies de Salmonella, o sorotipo Typhi é um dos enteropatógenos mais importantes em humanos, sendo este seu único reservatório. Este sorovar causa febre tifóide, gastroenterite, bacteremia e septicemia..
Por este motivo, é relevante incluir este ágar ao analisar amostras de água, fezes ou alimentos onde se suspeite da sua presença..
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Como a maioria dos meios de cultura, o Ágar Bismuto Sulfito contém nutrientes para promover o crescimento bacteriano, como peptonas e extrato de carne. Da mesma forma, a glicose funciona como fonte de energia e carbono..
No entanto, nem todas as bactérias crescerão neste meio, pois o Ágar Bismuto Sulfito é um meio seletivo. Ele contém compostos que inibem o crescimento de microrganismos Gram positivos e certas bactérias Gram negativas. Esses compostos são: o indicador de sulfito de bismuto e verde brilhante.
Por sua vez, o fosfato dissódico mantém a osmolaridade e o pH do meio.
Além disso, o ágar sulfito de bismuto é um meio diferencial graças à presença de sulfato ferroso, que mostra a formação de HdoisS. O HdoisS formado por bactérias reage com sulfato ferroso e forma um precipitado preto insolúvel claramente visível.
Por fim, o ágar-ágar fornece consistência sólida ao meio..
Pesar 52,3 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água. Aqueça a mistura para ferver por 1 minuto, mexendo sempre, até que esteja completamente dissolvido. Não superaqueça muito. Este meio não é autoclavado, pois o calor extremo danifica o meio de cultura..
Deixe esfriar a 45 ° C e agite antes de servir em placas de Petri estéreis. Recomenda-se fazer chapas com boa espessura. Para isso, deve-se colocar 25 ml em cada prato. Vamos solidificar. Por se tratar de um meio não esterilizado, é normal que seja sugerido seu uso imediato.
No entanto, um estudo realizado por D'aoust em 1977, mostrou que existe uma melhor recuperação da Salmonella typhimurium Y Salmonella enteritidis como as idades médias do Ágar Bismuto Sulfito, o desempenho dos serovares não é afetado Typhi Y Paratyphi B.
D'aoust recomenda o uso das placas no 4º dia de refrigeração, embora alerte que à medida que o meio envelhece, a seletividade diminui, desenvolvendo mais facilmente cepas de Proteus vulgaris.
Por esse motivo, para amostras altamente contaminadas, como fezes, é preferível usar o meio recém-preparado. Caso contrário, use no dia 4 de sua preparação. Outros autores recomendam o uso dos pratos no dia seguinte ao preparo, armazenados na geladeira..
As placas resfriadas devem ser temperadas antes do uso. O pH do meio deve ser 7,5 ± 0,2. A cor do meio bruto é bege e o meio preparado é opalescente cinza esverdeado.
Entre as amostras que podem ser plantadas neste meio estão amostras de fezes, água potável ou residual e alimentos..
Para melhorar os isolados, recomenda-se a realização de um tratamento de pré-enriquecimento com caldo de lactose e após o enriquecimento com caldo de tetrationato ou caldo de selenito de cistina, antes da semeadura em ágar sulfito de bismuto..
As placas são incubadas a 35 ° C ± 0,2 por 24 a 48 horas, em aerobiose.
As colônias de Salmonella Typhi eles são geralmente vistos neste ágar dentro de 24 horas com um centro preto e rodeado por um halo verde brilhante. Considerando que, em 48 horas eles ficam completamente pretos devido à formação de sulfeto de hidrogênio.
Salmonella Paratyphi A apresenta colônias com características variáveis. Após 18 horas de incubação, podem ser observadas colônias pretas, verdes ou transparentes com aspecto mucóide. Enquanto, às 48 horas, eles são completamente pretos e às vezes com um brilho metálico pronunciado..
S. Paratyphi A tende a escurecer o ambiente ao redor da colônia.
Salmonella sp mostram colônias pretas ou cinza-esverdeadas, com ou sem brilho metálico, e podem ou não enegrecer o ambiente circundante.
As cepas de coliformes geralmente são totalmente inibidas, mas se crescem, desenvolvem-se como colônias opacas verdes ou marrons sem brilho metálico. Não manche o meio ao redor da colônia.
-Inóculos muito fracos podem causar colônias de Salmonella Typhi verde claro, passando despercebido e a cultura sendo relatada como negativa.
- O Ágar Bismuto Sulfito pode inibir a recuperação de algumas espécies de Salmonella, como S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Este meio inibe a maioria das espécies do gênero Shigella.
- S. Typhi e S. arizonae pode dar colônias muito semelhantes.
-Coliformes que produzem HdoisS como Proteus e Citrobacter produzem colônias semelhantes às de Salmonella, portanto é necessário realizar testes de identificação bioquímica..
-Deve ser feito um bom traçado para obter colônias isoladas; é a única forma de observar as características típicas das colônias do gênero Salmonella..
Para o controle da esterilidade, uma placa não inoculada é incubada a 37 ° C, espera-se que não haja crescimento ou alteração de cor..
Para controle de qualidade, cepas conhecidas como:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Espera-se que Escherichia coli Y Shigella flexneri são parcialmente inibidos pelo desenvolvimento de colônias marrom-esverdeadas e marrons, respectivamente. Considerando que, ambas as salmonelas devem ter um excelente desenvolvimento com colônias pretas com brilho metálico, e finalmente Enterococcus faecalis deve ser totalmente inibido.
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