Rosa de bengala É um teste laboratorial baseado na reação antígeno-anticorpo para o diagnóstico da brucelose. A técnica permite a detecção de anticorpos específicos contra a bactéria Brucella abortus em amostras de soro humano. O resultado pode ser relatado qualitativamente ou semiquantitativamente.
A forma qualitativa expressa se o paciente é positivo ou negativo para o teste, ou seja, se há ou não anticorpos. Enquanto isso, o relatório semiquantitativo é relatado em UI / ml e indica a quantidade aproximada de anticorpos presentes. Ressalta-se que os anticorpos só serão produzidos se o paciente tiver entrado em contato com o microrganismo.
Pela sua grande simplicidade, alta sensibilidade e especificidade, é uma das técnicas de soroaglutinação mais utilizadas na medicina como teste inicial para o diagnóstico desta doença..
Alguns pesquisadores compararam a eficácia do teste Rosa Bengala com outras técnicas, como soroaglutinação (antígenos febris) e observaram que, embora haja boa correlação, eles viram casos isolados em que o teste do antígeno febril foi negativo e rosa de positivo exacerbação.
A diferença obtida deveu-se ao fato desses pacientes possuírem uma subclasse de anticorpos IgG contra Brucella abortus com melhor capacidade de ligação em pH ácido, portanto, eles poderiam reagir com o reagente Rosa Bengala, mas não com o de antígenos febris.
Nesse sentido, sugeriram que os reagentes da técnica do antígeno febril sejam modificados para um pH ácido para que possam detectar esse tipo de casos..
Índice do artigo
O Reagente Rose Bengal consiste em uma suspensão antigênica. É composto pela cepa S99 de Brucella abortus, diluído em um tampão de lactato ácido (pH 3,6), mais fenol e o corante Rosa Bengala.
Portanto, na amostra o que se busca são anticorpos anti-Brucella, se estes estiverem presentes irão reagir com o antígeno reagente e será observada uma reação de aglutinação macroscopicamente visível. O teste detecta anticorpos IgM ou IgG.
Isso significa que ele pode detectar a doença tanto na fase aguda, onde predominam os anticorpos IgM, quanto na fase crônica, onde predominam os anticorpos IgG..
Isso representa uma vantagem, pois aumenta a sensibilidade do teste, mas ao mesmo tempo é uma desvantagem, pois não discrimina entre uma fase e outra, pois a reação com anticorpos IgM e IgG são idênticas.
O teste deve ser sempre realizado em conjunto com um controle negativo e um controle positivo. O controle negativo contém soro animal sem anticorpos e o controle positivo contém soro de origem animal com 50 UI / ml de anticorpos anti-Brucella..
A brucelose é uma doença grave que tende a ser crônica e perigosa, por isso é muito importante que seja diagnosticada precocemente. É uma zoonose e humanos podem ser infectados pelo contato direto com material contaminado, sendo as pessoas mais vulneráveis os veterinários e tratadores de animais.
A infecção também pode ocorrer pelo consumo de carnes cruas infectadas, entre outras formas de contágio.
Esta doença ataca localmente ou sistemicamente. A forma sistêmica é a mais grave, pois vários órgãos podem ser afetados, incluindo o sistema endotelial do retículo (fígado, baço, medula óssea), pele (celulite e linfadenopatia), sistema respiratório (pneumonia), sistema musculoesquelético (artrite, sacroileíte e espondilite ), entre outros.
O teste Rosa Bengala é uma técnica muito útil para a realização de uma triagem inicial, pois é muito barato, fácil de usar e com grande especificidade e sensibilidade..
Casos de falsos negativos e falsos positivos são muito raros e podem ocorrer em pessoas com títulos de anticorpos muito baixos (< 25 UI/ml) o extremadamente altos (>1000 IU / ml), respectivamente.
-Kit Rosa Bengala
-Fundo branco da placa de aglutinação
-Pipeta de 50 µl
-Rotator (opcional)
-Vórtice
Os kits comerciais Rose Bengal vêm com reagentes prontos para uso.
-Reagentes de têmpera antes de iniciar o trabalho.
-As placas de aglutinação têm círculos desenhados, cada um para uma amostra diferente. Use 3 círculos, o primeiro para o controle negativo, o segundo para a amostra e o terceiro para o controle positivo.
-Coloque uma gota ou 50 µl dos controles e a amostra em seu círculo correspondente.
-Misture o Reagente Rosa Bengala usando um vórtice. Coloque uma gota ao lado das colocadas anteriormente.
-Misture com palitos de madeira (use um para cada amostra ou controle). Faça movimentos circulares e espalhe de forma que cubra todo o círculo.
-Coloque a placa em um rotador automático de 80 a 100 RPM ou gire manualmente por 4 minutos. Leia a prova no final deste tempo.
-Verifique se os controles deram conforme o esperado. Compare a reação da amostra de teste com os controles. Relate como positivo se aglutinação for observada e como negativo se não houver aglutinação.
Um teste positivo indica que o paciente possui uma quantidade igual ou superior a 25 UI / ml de anticorpos anti-Brucella.
Se na reação qualitativa a amostra for fortemente positiva, pode ser semiquantificada. Para isso, são feitas duplas diluições seriadas da amostra com soro fisiológico. O procedimento descrito acima é realizado com cada diluição..
Também é interpretado pela observação da aglutinação macroscopicamente. O resultado será o título da maior diluição em que um resultado positivo foi observado.
Para calcular o valor aproximado de anticorpos anti-Brucella, a seguinte fórmula é usada:
25 IU / ml x título de reação = IU / ml
Exemplo, se um paciente no teste semiquantitativo apresentar resultado positivo na diluição ½, ¼ e 1/8 e começar a ser negativo a partir da diluição 1/16, isso significa que o paciente possui um título de 8.
Aplicando a fórmula:
25 UI / ml x 8 = 200 UI / ml
-Os kits têm prazo de validade e devem ser respeitados. Não deve ser usado se o reagente estiver vencido.
-Durante o uso, certifique-se de que o reagente não contém partículas sólidas, pois isso é um sinal de deterioração..
-Armazenar entre 2 e 8 ° C.
-Não congele, este ato danifica irreparavelmente o reagente.
-Sempre execute o teste junto com os controles negativo e positivo.
-A técnica tolera amostras de soro com certo grau de lipemia e hemólise, porém não é aconselhável o uso de soros excessivamente lipêmicos e hemolisados, pois ambas as condições alteram o resultado do teste..
-Sempre aqueça os reagentes à temperatura ambiente antes de iniciar a análise..
-Não interpretar reações que demoram mais do que o tempo recomendado, pois isso gera o relato de falsos positivos, pois após certo tempo o reagente precipita, simulando uma reação positiva..
-A técnica é 100% sensível e tem uma especificidade de 98%.
-Após uma semiquantificação de 1000 UI / ml existe a possibilidade de observar um efeito pró-zona (falso negativo devido ao excesso de anticorpos em relação à quantidade de antígenos).
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