O Reagente de Benedict é uma solução azulada de cobre usada para detectar a presença de açúcares redutores: aldeídos, alfa-hidroxicetonas e hemicetais. Foi desenvolvido por Stanley R. Benedict (1884-1936).
Os açúcares alfa-hidroxicetonas são caracterizados por terem um grupo hidroxila na vizinhança da cetona. Enquanto isso, um hemicetal é um composto que resulta da adição de um álcool a um aldeído ou cetona. O reagente de Benedict reage indiscriminadamente com todos esses açúcares redutores.
O método de Benedict é baseado na ação redutora dos açúcares sobre o Cu.dois+, de coloração azul, que o transforma em Cu+. The CU+ forma um precipitado vermelho-tijolo de óxido cuproso. Porém, dependendo da concentração de açúcares, um espectro de cores aparece (imagem superior).
Observe que se o reagente de Benedict for adicionado a um tubo de ensaio sem açúcares redutores (0%), ele não sofre nenhuma alteração em sua cor azulada. Assim, quando a concentração for superior a 4%, o tubo de ensaio fica manchado de marrom..
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O reagente foi criado pelo químico americano Stanley Rossiter Benedict em 1909, que publicou seu artigo científico Um reagente para detecção de açúcares redutores, no jornal J. Biol. Chem.
Além disso, Lewis e Benedict (1915) publicaram um método para a determinação de açúcares redutores no sangue, usando picrate como indicador; mas deixou de ser usado devido à falta de especificidade.
O reagente de Benedict é muito semelhante ao de Fehling. Eles diferem porque Benedict usa o íon citrato e o sal de carbonato de sódio; enquanto Fehling usa o íon tartarato e hidróxido de sódio.
O teste de Benedict é qualitativo, ou seja, detecta apenas a presença de açúcares redutores. No entanto, o reagente de Benedict pode ser quantitativo se tiver tiocianato de potássio em solução, que forma um precipitado branco de tiocianato de cobre que pode ser titulado usando padrões de glicose..
O reagente Benedict ainda é usado para detectar a presença de glicose na urina e é um indicativo de diabetes no paciente, cuja urina é submetida ao teste ou teste Benedict. Embora não se possa descartar que a glicosúria tenha uma origem diferente.
Por exemplo, o aumento da glicosúria é encontrado em condições como: gravidez, glicosúria renal primária, acidose tubular renal, síndrome de Fanconi primária ou secundária, hiperaldosteronismo e pancreatite aguda ou câncer pancreático..
O reagente de Benedict é azul devido à presença de Cudois+, que é reduzido a Cu+ pela ação de açúcares redutores; neste caso, glicose, formando um precipitado de óxido de cobre (I) vermelho-tijolo.
A coloração e a formação do precipitado no teste de Benedict aplicado à urina variam de acordo com a concentração do açúcar redutor. Se a concentração de glicose na urina for inferior a 500 mg / dL, a solução torna-se verde e não há formação de precipitado.
Uma concentração de glicose na urina de 500 - 1.000 mg / dL causa um precipitado verde no teste de Benedict. A uma concentração superior a 1.000 a 1.500 mg / dL, causa a formação de um precipitado amarelo.
Se a concentração de glicose for 1.500 - 2.000 mg / dL, um precipitado laranja será visto. Finalmente, uma concentração de glicose na urina é superior a 2.000 mg / dL, causará a formação de um precipitado cor de tijolo..
Isso indica que o teste de Benedict tem caráter semiquantitativo e o resultado é relatado por meio de cruzamentos. Assim, por exemplo, a formação de um precipitado verde corresponde a uma cruz (+); e a formação de um precipitado vermelho tijolo, corresponde a quatro cruzes (++++).
O reagente de Benedict detecta a presença de açúcares redutores que possuem um grupo funcional livre ou um grupo funcional cetona livre, como parte de sua estrutura molecular. É o caso da glicose, galactose, manose e frutose (monossacarídeos), além da lactose e maltose (dissacarídeos).
A sacarose e o amido não reagem com o reagente de Benedict porque possuem grupos redutores livres. Além disso, existem compostos que interferem no teste de Benedict na urina, dando falsa positividade; é o caso do salicilato, penicilina, estreptomicina, levodopa, ácido nalidíxico e isoniazida.
Existem substâncias químicas presentes na urina que podem reduzir a reação de Benedict; por exemplo: creatinina, urato e ácido ascórbico.
Os componentes do reagente de Benedict são os seguintes: sulfato de cobre pentahidratado, carbonato de sódio, citrato trissódico e água destilada..
Sulfato de cobre pentahidratado, CuSO45hdoisO, contém Cudois+: é o composto que dá ao reagente de Bento sua cor azul. Açúcares redutores atuam no Cudois+, produzindo sua redução para Cu+ e a formação de um precipitado de óxido cuproso (CudoisO) tijolo vermelho.
O carbonato de sódio gera um meio alcalino, necessário para que ocorra a redução do cobre. O carbonato de sódio reage com a água, gerando bicarbonato de sódio e o íon hidroxila, OH-, responsável pela alcalinidade do meio necessário para que o processo redutivo ocorra.
O citrato de sódio forma um complexo com o cobre (II) que o impede de sofrer uma redução para Cu (I) durante o armazenamento.
5 mL do reagente de Benedict são colocados em um tubo de ensaio de 20 x 160 mm e 8 gotas de urina são adicionadas a ele. O tubo de ensaio é agitado suavemente e colocado em um recipiente com água fervente por 5-10 minutos..
Após este tempo, o tubo é retirado do banho-maria e sua superfície é resfriada com água corrente para finalmente ter a leitura do resultado obtido na realização do teste de Benedict (as cores).
A redução de Cu (II) durante o teste de Benedict pode ser descrita da seguinte forma:
RCHO + 2 Cudois+ (no complexo) + 5 OH- => RCOO- + CudoisO + 3 HdoisOU
RCHO = aldeído; RCOO- = (íon carboxilato); CudoisO = óxido cuproso, um precipitado vermelho-tijolo.
173 gramas de citrato de sódio e 100 gramas de carbonato de sódio são pesados e dissolvidos juntos em 800 mL de água destilada morna. Se forem observados traços de substâncias não dissolvidas, a solução deve ser filtrada.
Por outro lado, 17,3 gramas de sulfato cúprico pentahidratado são dissolvidos em 100 mL de água destilada..
Posteriormente, as duas soluções aquosas são suavemente misturadas e continuadas com agitação permanente, perfazendo até 1.000 mL com água destilada..
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