Fundação e preparação Orcein

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Anthony Golden

O orceína é uma cor púrpura natural, extraída de vários líquenes como: orquídea ou urchila, líquen fruticoso, Rocella Tinctoria Y Lecanora parella principalmente. O Rocella Tinctoria É encontrada no continente africano e americano, embora possa ser substituída por outras espécies localizadas na Europa..

Esta coloração tem sido amplamente utilizada em estudos citogenéticos desde os tempos antigos. Nesse sentido, a preparação de orceína que inclui ácido acético foi introduzida pela LaCourt em 1941, razão pela qual foi inicialmente chamada de técnica de LaCourt..

Estrutura química da orceína e solução de orceína. Fonte: Wikipedia.org/ Oguenther at de.wikipedia (Dr. Guenther) [domínio público]

Da mesma forma, por sua simplicidade e baixo custo, tem sido utilizado na fabricação de tornassol (corante extraído de líquenes) e em estudos histológicos (coloração de células e tecidos)..

Vários estudos usaram essa coloração combinada com outros produtos químicos, como picrocarminato de amônia e ácido acético, para tingir fibras elásticas e cromossomos, respectivamente. Atualmente, a orceína continua a ser usada nos estudos citogenéticos de animais e plantas..

Recentemente, Silva et al. 2017 usou com sucesso esta mancha para observar as várias mudanças que ocorrem nas fibras elásticas da pele do polegar em idosos chilenos. Este estudo revelou como as fibras do polegar se alteram com o envelhecimento.

Nesse sentido, observou-se que as fibras elásticas apresentam coloração preto-acastanhada em indivíduos com mais de 80 anos; enquanto nos mais jovens (a partir dos 60 anos) são vistos como uma cor marrom-avermelhada. O citoplasma e outras estruturas celulares ficam verdes amarelados.

Isso permitiu corroborar a presença e o estado das fibras elásticas, quanto à sua disposição, quantidade e integridade. Por outro lado, também foi apontado que a orceína é de grande ajuda para identificar aneurismas e diagnosticar arterite, entre outras condições..

Índice do artigo

  • 1 justificativa
  • 2 Preparação
    • 2.1 Solução de aceto-orceína 1%
    • 2.2 Solução lacto-propônica de orceína 1%
    • 2.3 Orceína A e Orceína B
  • 3 Considerações finais
  • 4 referências

Base

A orceína faz parte do grupo de corantes oxazina e a coloração é baseada em sua afinidade pelo DNA. O corante se liga à carga negativa dessa molécula, representada pelo grupo fosfato. É por isso que os cromossomos estão manchados de roxo.

No entanto, o resto das estruturas celulares assumem uma cor diferente. Especificamente, no caso das fibras elásticas, elas são de cor marrom-avermelhada, núcleos celulares de azul a roxo escuro, enquanto o colágeno não mancha.

Por esse motivo, a orceína é usada para tingir a cromatina e diferenciar o sexo em algumas espécies de moscas. Da mesma forma, os núcleos e algumas inclusões hepáticas produzidas pelos antígenos da hepatite B podem ser corados..

As soluções de orceína têm funções específicas na coloração. A orceína A tem a função de amolecer as membranas celulares, causando sua morte e paralisando o processo de sua divisão. Enquanto isso, a orceína B se encarrega de completar a coloração por meio de sua adesão aos cromossomos..

Preparação

Solução de aceto-orceína 1%

Para preparar uma solução a 1% de aceto-orceína, 2 gramas de orceína são dissolvidos em 45 ml de ácido acético glacial, de preferência quente, e são adicionados 55 ml de água destilada à temperatura ambiente..

Em seguida, é constantemente misturado para homogeneizar a solução, para depois deixá-la descansar até que esfrie. Por fim, é armazenado a 4ºC em garrafas escuras. Esta preparação foi utilizada pela Flores 2012 para observar as fases de maturação de oócitos de vaca..

Nesse caso, por exemplo, a solução de aceto-orceína é colocada sobre o tecido previamente fixado em ácido acético-etanol por 24 horas. Este processo de coloração é realizado por 30 minutos e o tecido é posteriormente descolorido..

Da mesma forma, pode ser usado na identificação de organelas em tecidos multicelulares. Neste caso, um esfregaço da mucosa bucal é corado com uma gota da solução de aceto-orceína, a lamela é colocada na lâmina e imediatamente o núcleo da célula com suas subestruturas pode ser observado..

Solução lacto-propônica de orceína 1%

Além disso, a orceína pode ser preparada com outros produtos químicos, como ácido láctico e ácido propiônico. Para isso, um grama de orceína é dissolvido em uma solução pré-misturada à temperatura ambiente de 23 ml de ácido láctico e 23 ml de ácido propiônico; completando o volume com água destilada até 100 ml.

Com esta solução de orceína lacto-propiônica é possível observar as diferentes fases da divisão meiótica das células vegetais. Nesse caso, a amostra pré-fixada e hidrolisada é colocada por 15 minutos na solução de orceína lacto-propiônica e, em seguida, o tecido é espalhado em lâminas de microscópio..

No estudo de Duque de 2016 sobre cromossomos de politeno, ele usou uma preparação de 2 gramas de orceína diluída em ácido acético e 85% de ácido lático, diluindo com uma solução de ácido acético a 65%. Finalmente, ele olhou para os cromossomos nas glândulas salivares do Drosophila melanogaster.

Orcein A e Orcein B

É importante observar que dependendo da amostra e do que será avaliado, a solução de orceína apropriada é preparada. Assim, por exemplo, ácido clorídrico 1 N é adicionado à solução de orceína A para observar a divisão das células..

Enquanto a solução de orceína B é dissolvida em ácido acético a 45%. Esta técnica é um método abreviado de coloração e geralmente é usada como um complemento para a coloração de estruturas cromossômicas..

Pensamentos finais

Há séculos, em países do continente americano, como a Argentina, é possível obter líquenes como: Lecanora, Parmelia Y Umbilicaria, que são grandes fontes de orceína. Também áreas europeias, como as Ilhas Canárias, eram na época grandes produtoras de orquídeas..

Este foi exportado para outras cidades deste mesmo continente, como Gênova e países como a Inglaterra, enquanto a Holanda monopolizou a fabricação de tornassol da orquila. Então, mais tarde, esse líquen foi reduzido até que estava prestes a se extinguir.

Isso fez com que a orquídea fosse substituída por outras plantas com propriedades corantes. No entanto, o surgimento de corantes sintéticos contribuiu para o encerramento do comércio dessa fonte de líquen de orceína..

Isso foi possível graças a Cocq, que em 1812 descreveu a síntese da orceína, sabendo então que ela é sintetizada por um composto fenólico denominado orcinol. No entanto, apesar disso, a orceína natural ainda é a preferida.

Isso pode ocorrer porque o orcinol é um composto de cheiro muito forte, cuja exposição prolongada pode acarretar riscos à saúde, como a perda da capacidade de detectar odores. Esses danos à hipófise podem ir de temporários a permanentes quanto maior for a exposição..

Referências

  1. Ortega L, García R, Morales C. "Aplicação de lacases produzidas por fungos para degradação de corantes microbiológicos (orceína e violeta cristal)."Juventude na Ciência 2. 2015; 633-637. Disponível em: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
  2. Barcat J. Orceína e Elastic Fibers. Medicina (Buenos Aires) 2003; 63: 453-456. Disponível em: Medicinabuenosaires.com.
  3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Características histológicas da pele da face voadora do polegar em indivíduos chilenos com desbotamento do datilograma. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107-1113. Disponível em: scielo.conicyt.
  4. Orrillo M, Merideth B. “Potato reproductive biology and cytogenetics.” International Potato Center (CIP). Manual técnico. Disponível em: research.cip.cgiar.org/
  5. Flores F. “Coleta, cultivo e maturação em vitro, de oócitos de vaca (bos taurus) nas montanhas bolivianas. " [Tese de mestrado]. Universidade Nacional do Altiplano, Puno-Peru; 2012. Disponível em: repositorio.unap.edu.pe.
  6. Cromossomos Duque C. Polytenic: Uma olhada no fenômeno de endoreduplicação. Universidade Nacional da Colômbia, Medellín; 2016. Disponível em: edu.
  7. Camarena F. Cellular and Molecular Biology. Manual prático. Universidade Autônoma da Baja Califórnia. 2017. Disponível em: fish.ens.uabc.mx.
  8. FAO / IAEA. 2018. Manual para diferenciar moscas de Anastrepha ludens (Loew) selvagem e criado de linhagem normal (“bissexual”) e linhagem geneticamente sexada (Tapachula-7), irradiada e não irradiada. Guillen Aguilar J.C, López Muñoz L, López Villalobos E.F e Soto García D. N. Organização para Alimentação e Agricultura das Nações Unidas. Roma, Itália, 95 pp.
  9. Orcein. (30 de novembro de 2018). Wikipédia, a enciclopédia livre. Data de consulta: 03:38, 31 de julho de 2019 es.wikipedia.org.
  10. Merck Millipore. (2018, 16 de julho). Microscopia de orceína para microscopia Certistain. Disponível em: merckmillipore.com

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