O Ágar XLD ou Ágar Xilose Lisina Deoxicolato é um meio de cultura sólido seletivo e diferencial para o isolamento de enteropatógenos. Taylor projetou a fórmula do ágar XL (Xilose, Lisina) para melhorar o isolamento do gênero Shigella.
Ele observou que esse gênero foi inibido na maioria dos meios destinados ao isolamento de enteropatógenos. Posteriormente, foram adicionados desoxicolato de sódio, tiossulfato de sódio e citrato férrico de amônio para aumentar sua seletividade. Esta fórmula provou ser útil para o isolamento de Shigella e Salmonella.
O ágar XLD é composto de extrato de levedura, desoxicolato de sódio, xilose, lisina, lactose, sacarose, tiossulfato de sódio, citrato férrico de amônio, cloreto de sódio, vermelho de fenol e ágar. Na maioria dos laboratórios de bacteriologia, o ágar duo XLD e o ágar SS são usados para estudar amostras fecais de Shigella e Salmonella..
Outros laboratórios preferem a combinação de CHROMagar Salmonella e ágar XLD, entre outras opções disponíveis. Essas duplas podem ser preparadas em placas de Petri duplas. Em um lado eles colocam ágar XLD e no lado oposto o outro meio escolhido.
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O ágar XLD contém extrato de levedura, que serve como fonte de nutrientes para os microrganismos que se desenvolvem neste ágar. Além disso, a presença de carboidratos (xilose, sacarose e lactose) fornecem energia para as bactérias que podem fermentá-los.
Como substância inibidora, possui desoxicolato de sódio; Isso evita o crescimento de bactérias Gram positivas, tornando o meio seletivo.
Como já mencionado, o ágar XLD contém xilose; Este carboidrato é fermentado por todas as bactérias que crescem neste meio, exceto pelo gênero Shigella..
Essa é uma das características que lhe conferem caráter diferencial, pois as colônias de Shigella se diferenciam das demais pelo desenvolvimento de colônias vermelhas, enquanto as demais bactérias produzem colônias amarelas..
O gênero Salmonella também fermenta a xilose, gerando inicialmente colônias amarelas. No entanto, após esgotar o carboidrato xilose, ele ataca a lisina por sua enzima lisina descarboxilase. A descarboxilação da lisina gera álcalis que transformam a cor da colônia e do meio circundante no vermelho original.
Esse comportamento só é realizado pela Salmonella, uma vez que os coliformes que descarboxilam a lisina não conseguem alcalinizar o meio. Isso ocorre porque os coliformes também fermentam a lactose e a sacarose presentes; portanto, a produção de ácidos é muito alta, deixando a colônia amarela nessas bactérias.
Deve-se notar que o gênero Salmonella não fermenta sacarose ou lactose.
O ágar XLD também permite a detecção de espécies de Salmonella que produzem HdoisS; Para isso, tem como fonte o enxofre representado pelo tiossulfato de sódio e um revelador da reação que é o citrato férrico de amônio..
Este último reage com o HdoisS (gás incolor) e forma um precipitado preto visível insolúvel de sulfato de ferro. Nesse sentido, as características das colônias de salmonela serão vermelhas com o centro preto..
Deve-se notar que para a reação de formação de HdoisSim, é necessário um pH alcalino. É por isso que outras Enterobacteriaceae que formam HdoisS não conseguem ou fazem mal neste meio, pois a alta acidez que produzem ao fermentar os carboidratos presentes inibe ou atrapalha a reação..
Finalmente, o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico; o ágar é o agente de solidificação e o vermelho de fenol detecta mudanças no pH, alterando a cor das colônias e do meio..
Pesar 55 g de meio XLD desidratado e dissolver em 1 litro de água. Aquecer e mexer a mistura até atingir o ponto de ebulição. Não superaquecer, pois o calor danifica o meio e cria um precipitado que altera a morfologia das colônias típicas.
Este meio não deve ser autoclavado. Ao dissolver, deve ser passado para banho-maria a 50 ° C. Ao esfriar, deve ser servido diretamente em placas de Petri estéreis. Eles podem ser derramados em pratos individuais ou duplos. Eles são deixados para solidificar e armazenados na geladeira até o uso..
Temperar antes de usar. Por se tratar de um meio não estéril, recomenda-se prepará-lo próximo à data de seu uso..
O pH final do meio deve ser 7,4 ± 0,2. A cor do meio preparado é laranja-avermelhado, translúcido, sem precipitado..
Se você tiver ágar base Xilose Lisina (XL), poderá adicionar desoxicolato de sódio, tiossulfato de sódio e citrato de ferro amônio. Desta forma, a fórmula de ágar XLD é obtida.
O ágar XLD é utilizado para a recuperação de enteropatógenos, principalmente do gênero Shigella e secundariamente do gênero Salmonella. É útil para avaliar amostras de fezes, água e alimentos.
Amostras de fezes podem ser semeadas diretamente em ágar XLD, fazendo uma boa distribuição do material para obtenção de colônias isoladas.
Para melhorar a recuperação de Salmonella, o ágar XLD pode ser semeado a partir de meios de enriquecimento de Salmonella..
No caso de alimentos, podem ser usados caldos de enriquecimento para Salmonella e Shigella. Para Salmonella pode-se usar caldo de selenita cistina, caldo de tetrationato verde brilhante, entre outros..
No caso da Shigella, pode ser enriquecido com caldo Shigella com 0,5 µ / ml de novobiocina, incubado a 42 ° ± 1 ° C por 16-20 horas.
Na análise de água, recomenda-se a técnica de filtração por membrana e o uso de ágar XLD, entre outros..
O meio semeado é incubado aerobicamente a 35 ° C durante 24 a 48 horas..
Observam-se as colônias típicas de cada gênero, as colônias suspeitas devem ser submetidas a testes bioquímicos para sua identificação..
As seguintes cepas bacterianas podem ser usadas para avaliar o controle de qualidade do meio: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella Sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.
O gênero Salmonella é caracterizado por apresentar neste meio colônias vermelhas com centro preto ou colônias completamente pretas. Já no gênero Shigella, as colônias devem ser vermelhas, ou seja, a cor do meio.
Em caso de Escherichia coli espera-se que seja total ou parcialmente inibido; se crescer, as colônias são amarelas. A fim de Proteus mirabilis espera-se um fraco crescimento com colônias rosa com ou sem centro preto. Eventualmente, o gênero Klebsiella crescerá como colônias amarelas.
O ágar XLD é amplamente utilizado em laboratórios de bacteriologia devido a sua alta eficiência na recuperação de Shigella e também possui uma boa recuperação do gênero Salmonella..
Rall et al. (2005) em seu trabalho intitulado "Avaliação de três caldos de enriquecimento e cinco meios sólidos para a detecção de Salmonella em aves" demonstraram que dos 3 meios clássicos testados (ágar verde brilhante, ágar SS e ágar XLD), XLD ágar teve a melhor taxa de recuperação.
As percentagens de recuperação foram as seguintes: 13,8% para ágar verde brilhante, 27,6% para SS e 34,5% para XLD. Foi superado apenas pelo meio cromogênico Rambach ágar com 48% de recuperação e o CHROMagar com 79,3%..
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