Justificativa, preparação e usos do ágar soja tripticaseína

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Jonah Lester

O Trypticasein Soy Agar ou Trypticase Soy Agar é um meio de cultura sólido, não seletivo e nutritivo. É designado pelas letras TSA por sua sigla em inglês Trypticase Soy Agar. É composto por tripteína, peptona de soja, cloreto de sódio e ágar-ágar.

Devido ao seu alto poder nutritivo, é ideal para o cultivo de microrganismos moderadamente exigentes e não exigentes. O meio sem suplementos adicionais não é recomendado para culturas primárias, mas é muito útil para subcultivar linhagens puras e mantê-las viáveis, entre outros usos..

Fatias de ágar soja tripticaseína em tubos com tampa de baquelite. Fonte: Fotografia tirada pelo autor MSc. Marielsa gil.

Além disso, este ágar serve de base para a preparação de meios enriquecidos como o ágar sangue, especialmente quando é necessário observar os padrões de hemólise e montar os táxons de optoquina e bacitracina, necessários no diagnóstico de Streptococcus pneumoniae Y Streptococcus pyogenes respectivamente.

Por outro lado, quando combinado com antibióticos, é útil para isolar microorganismos anaeróbios facultativos e estritos de importância clínica de amostras com flora mista..

Por fim, a composição do ágar tripticaseína soja e seu desempenho atendem aos requisitos estabelecidos pelas diferentes farmacopéias (européia, japonesa e norte-americana)..

Índice do artigo

  • 1 justificativa
  • 2 Preparação
    • 2.1 Placas de Agar de Soja Tripticaseína
    • 2.2 Placas de ágar soja tripticaseína suplementadas com sangue
    • 2.3 Placas de ágar soja tripticaseína suplementadas com sangue aquecido
    • 2.4 Cunhas de Agar de Soja Tríptico
  • 3 usos
  • 4 semeados
  • 5 Controle de qualidade
    • 5.1 Controle de esterilidade
    • 5.2 Controle de crescimento
    • 5.3 Controle de crescimento e padrão de hemólise do ágar tripticaseína soja suplementado com sangue
  • 6 referências

Base

Para o bom desenvolvimento das bactérias, é necessária a presença de suprimentos de energia, como aminoácidos, vitaminas, bases puricas e pirimídicas..

Nesse sentido, a tripteína e a peptona de soja fornecem esses nutrientes aos microrganismos, permitindo o seu pleno desenvolvimento. No entanto, para bactérias fastidiosas, é necessário suplementar este ágar com sangue desfibrinado ou sangue aquecido para aumentar seu enriquecimento..

Por outro lado, se forem adicionados antibióticos ao meio, ele se torna um meio seletivo. Você também pode adicionar 0,6% de extrato de levedura para favorecer o isolamento de espécies do gênero Listeria, enquanto a adição de telurito de cistina Y sangue de cordeiro é ideal para Corynebacterium diphteriae.

Finalmente, o cloreto de sódio fornece o equilíbrio osmótico ao meio e o ágar fornece a consistência sólida..

Preparação

Placas de Agar de Soja Tripticaseína

Para o preparo do ágar tripticaseína soja, 40 g do meio comercial desidratado devem ser pesados ​​em balança digital. Dissolve-se em um litro de água destilada contida em um frasco.

A mistura é deixada em repouso por 5 minutos e depois levada a uma fonte de calor para ajudar na dissolução do meio. Deve ser mexido com freqüência e fervido por 1 ou 2 minutos. Posteriormente, o meio é esterilizado na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Deixe esfriar a 50 ° C e distribua em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar, inverta, arrume nas abas e guarde na geladeira.

O pH final do meio deve ser 7,3 ± 0,2.

Ressalta-se que a cor do meio de cultura desidratado é bege claro e deve ser armazenado entre 10 a 35 ° C, em local seco.

Por sua vez, o ágar preparado é de cor âmbar claro. As placas preparadas devem ser armazenadas no refrigerador (2 a 8 ° C) até o uso..

As placas devem atingir a temperatura ambiente antes do uso.

Placas de ágar soja tripticaseína suplementadas com sangue

O ágar sangue é preparado adicionando 5% de sangue desfibrinado ao resfriar o ágar triptico de soja a 50 ° C. A mistura é homogeneizada girando com movimentos suaves.

Sirva em placas de Petri esterilizadas. A cor do meio deve ser vermelho cereja.

Placas de ágar soja tripticaseína suplementadas com sangue aquecido

Para preparar o ágar sangue à base de TSA, proceda da mesma forma que os procedimentos já descritos, mas ao sair da autoclave, deixe repousar até que a temperatura do meio esteja aproximadamente entre 56 a 70 ° C. Nesse momento, o sangue é colocado e misturado até que o meio fique marrom..

Sirva em placas de Petri esterilizadas. A cor do meio é castanho chocolate.

Cunhas de Agar de Soja Tríptico

O procedimento de preparo do ágar é o mesmo descrito para placas, com a diferença que ao invés de servir o meio em placas de Petri, ele é distribuído de 10 a 12 ml em tubos com tampa de baquelite antes da esterilização..

Posteriormente, os tubos são autoclavados a 121 ° C por 15 minutos. Ao saírem, apoiam-se com a ajuda de um suporte e deixam-se solidificar.

As cunhas preparadas são semeadas por área de superfície e servem para manter certos microorganismos não exigentes viáveis ​​por um determinado tempo..

Formulários

Trypticasein Soy Agar é usado nos seguintes casos:

-Como base para a preparação do ágar sangue clássico, usado rotineiramente na maioria dos laboratórios.

-O isolamento de bactérias fastidiosas.

-Observando o padrão de hemólise.

-Executando testes de diagnóstico.

-Como base para a preparação de ágar sangue especial para Corynebacterium diphteriae, com telurito de cistina Y sangue de cordeiro.

-Como base para preparar ágar sangue de cordeiro, mais canamicina-vancomicina para o crescimento de anaeróbios, especialmente Bacteroides sp.

-Para manutenção de cepas não exigentes (Bacterioteca).

-Contagem microbiana aeróbia no estudo do limite microbiano de amostras de água, meio ambiente, alimentos e cosméticos.

Semeado

As amostras podem ser semeadas diretamente na superfície do Trypticasein Soy Agar suplementado com sangue ou outros aditivos. É semeado por exaustão.

Considerando que, placas de ágar tripticaseína soja sem aditivos são geralmente usadas para subcultura de cepas microbianas (bactérias ou leveduras)..

Controle de qualidade

Controle de esterilidade

Para verificar a esterilidade dos diferentes meios preparados com ágar tripticaseína à base de soja, é recomendado fazer o seguinte: de cada lote preparado, 1 ou 2 placas ou tubos não inoculados devem ser incubados a 37 ° C por 24 horas para demonstrar sua esterilidade. Em todos os casos, deve permanecer sem crescimento.

Se for encontrada contaminação, todo o lote deve ser descartado..

Controle de crescimento

As seguintes cepas bacterianas podem ser usadas para estudar o funcionamento adequado do ágar tripticaseína soja: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 e Enterococcus faecalis ATCC 29212.

As cepas são semeadas e incubadas aerobicamente a 37 ° C por 24 horas.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório.

Cogumelos como Complex também podem ser usados Candida albicans ATCC 10231 e Aspergillus niger ATCC 16404. Bom crescimento é esperado para ambas as cepas.

Controle de crescimento e padrão de hemólise de ágar tripticaseína soja suplementado com sangue

As seguintes cepas podem ser usadas para verificar o funcionamento adequado do ágar sangue preparado com esta base: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 e Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Eles são semeados e incubados a 37 ° C em microaerofilicidade por 24 horas..

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório, levando em consideração que em S. pyogenes beta-hemólise (halo claro ao redor da colônia) deve ser observada e em ambas as cepas de S. pneumoniae hemólise alfa (halo esverdeado ao redor das colônias) deve ser observada.

Referências

  1. Colaboradores da Wikipedia. Trypticase I am agar. Wikipédia, a enciclopédia livre. 17 de dezembro de 2018, 15:47 UTC. Disponível em: https://en.wikipedia.org
  2. Britannia Laboratories. Ágar tripteína de soja. 2015. Disponível em: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories. Ágar soja tríptica. Disponível em: foodsafety.neogen.com
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana S.A.
  5. Laboratórios BD. Trypticase I am Agar. 2014. Disponível em: .bd.com

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