O Agar Salmonella-Shigella também conhecido como ágar SS, é um meio moderadamente seletivo e diferencial, especialmente desenvolvido para o isolamento de bactérias enteropatogênicas dos gêneros Salmonella e Shigella, tanto de amostras ambientais quanto clínicas..
O ágar SS tem uma composição complexa; É composto de extrato de carne, peptona, lactose, sais biliares, citrato de sódio, tiossulfato de sódio, citrato férrico, ágar, vermelho neutro, verde brilhante e água destilada. Dada a sua grande seletividade, podem ser semeadas amostras com abundante flora mista..
Em laboratórios de microbiologia, o meio Salmonella-Shigella é amplamente utilizado para investigar a presença de Salmonella e Shigella em amostras de fezes diarreicas, águas residuais, água potável e alimentos..
Às vezes é necessário usar caldo de pré-enriquecimento (caldo de lactose) e caldo de enriquecimento (caldo de selenito cistina) para recuperar cepas de Salmonella.
Essas etapas são necessárias quando se suspeita da existência de Salmonella em quantidade muito baixa, ou quando a cepa pode ser abusada por processos de produção industrial, principalmente alimentos processados. Também é aconselhável enriquecer as amostras de fezes de pacientes que foram tratados com antibióticos..
Posteriormente, o caldo enriquecido pode ser semeado em ágar Salmonella-Shigella e outros meios semelhantes, como ágar xilose, desoxicolato de lisina (XLD) e ágar entérico Hektoen (HE)..
Índice do artigo
Cada componente do meio de cultura Salmonella-Shigella tem uma função específica, e a mistura como um todo lhe confere as propriedades que o caracterizam..
O extrato de carne e peptona (digerido com caseína e tecido animal) fornecem os nutrientes necessários (nitrogênios, carbono e vitaminas) para o desenvolvimento de microrganismos capazes de tolerar o resto dos componentes..
O ágar-ágar é o responsável por dar a consistência sólida ao meio..
Este meio é altamente seletivo porque contém sais biliares, citrato de sódio e verde brilhante. Portanto, ele inibe o crescimento de todas as bactérias Gram positivas e da maioria dos bacilos Gram negativos, incluindo alguns coliformes..
Embora as bactérias do gênero Salmonella e algumas cepas de Shigella suportem esses compostos.
Principalmente, o gênero Salmonella é muito resistente aos sais biliares, tanto que são capazes de viver na vesícula biliar de alguns pacientes portadores que constantemente eliminam a bactéria em suas fezes..
A lactose é o carboidrato fermentável que ajuda a diferenciar as cepas que fermentam a lactose das não fermentadoras. Esta propriedade é evidenciada pela presença do indicador de pH, que neste meio é vermelho de fenol.
As cepas que fermentam a lactose dão colônias vermelhas, enquanto as cepas que não fermentam são incolores. Essa característica é importante, pois Salmonella e Shigella não fermentam lactose..
Por outro lado, este meio contém tiossulfato de sódio como fonte de sulfeto e citrato férrico como fonte de ferro. Ambos os compostos são capazes de diferenciar bactérias capazes de produzir sulfeto de hidrogênio. Estes reagem para formar um precipitado de sulfeto férrico preto insolúvel e visível..
Esta propriedade é encontrada em algumas cepas do gênero Salmonella. Normalmente suas colônias são planas e incolores com um ponto preto no centro. O resto das Salmonelas não produzem HdoisS e se desenvolvem como colônias incolores.
Por outro lado, as colônias do gênero Shigella são planas e incolores sem escurecimento..
Este meio é muito simples de preparar.
Pesar 63 g do meio comercial desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Aqueça a solução e mexa. A mistura pode ferver por até minutos.
Este meio não deve ser autoclavado. Depois de dissolvido, é servido diretamente em pratos esterilizados simples ou duplos..
Quando solidificam, são dispostos de forma invertida em placas e armazenados em geladeira (2-8 ° C) até o uso..
O meio após a preparação deve ter pH 7,2 ± 0,2 e uma cor laranja-avermelhada..
É importante permitir que as placas aqueçam antes de semear as amostras. A amostra original pode ser semeada diretamente, descarregando o material em uma parte do ágar e, em seguida, espalhando por exaustão a partir daí.
No caso de utilizar caldos enriquecidos, passe uma porção do caldo de selenita e semeie com espátula drigalski.
Incubar a 37 ° C por 24 horas em aerobiose.
Deve-se levar em consideração que a quantidade de gramas a pesar e o pH final do meio podem variar de uma casa comercial para outra. A base do meio sempre traz as indicações para o seu preparo.
É freqüentemente usado em análises de cultura de fezes e no estudo microbiológico de águas residuais, água potável e amostras de alimentos..
Freqüentemente, placas duplas são preparadas, em um lado do ágar Salmonella-Shigella é colocado e no outro ágar XLD.
-Algumas cepas de Shigella não crescem neste meio. Portanto, não é recomendado para o isolamento primário deste gênero..
-Nem toda colônia transparente com um centro preto é indicativa de Salmonella; Testes bioquímicos devem ser realizados para uma correta identificação, uma vez que as colônias de algumas cepas de Proteus são indistinguíveis das de Salmonella.
-O meio desidratado deve ser cuidado da exposição ao meio ambiente, pois é muito higroscópico. Portanto, deve ser mantido em ambiente seco e bem fechado. Aberto por períodos muito curtos.
-Com o tempo, os sais biliares no meio podem precipitar, formando uma imagem semelhante a um tapete dentro do ágar, mas isso não afeta os resultados..
-Algumas cepas de Shigella podem fermentar lentamente a lactose.
Para comprovar o bom funcionamento do meio, é aconselhável plantar cepas controle conhecidas ou certificadas e observar se o crescimento atende às características esperadas..
Para isso, você pode usar cepas de E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium ou Enterococcus faecalis.
Os resultados esperados são:
Escherichia coli --colônias convexas rosa.
Enterobacter e Klebsiella- grandes colônias e mucoides vermelhos ou rosa.
Shigella flexneri --colônias planas claras ou incolores.
Salmonella typhimurium - colônias incolores com centro preto.
Enterococcus faecalis-- inibição total.
Ainda sem comentários